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小鼠¦Â-连环蛋白£¨¦Â-catenin£©ELISA试剂盒使用说明书

  • 所属分类£º应用方法

    上传时间£º2017/10/10

  • 文件类型£ºjpg

    文件大小£º45 KB

  • 浏?#26469;?#25968;£º2323次

    下载次数£º288次

    需要积分£º0积分

  • 上传公司£º南京森贝伽生物科?#21152;?#38480;公司进入展台
  • 标签£º

资料简介

小鼠β-连环蛋白£¨β-catenin£©ELISA试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用目的£º本试剂盒用于测定小鼠血清£¬血浆及相关液体样本中小鼠β-连环蛋白£¨β-catenin£©含量¡£

实验原理£º

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本小鼠β-连环蛋白£¨β-catenin£©水平¡£用纯化的小鼠β-连环蛋白£¨β-catenin£©抗体包被微孔板£¬制成固相抗体£¬往包被单抗的微孔中?#26469;?#21152;入β-连环蛋白£¨β-catenin£©£¬再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合£¬形成抗体-抗原-酶标抗体复合物£¬经过彻底洗涤后底物TMB显色¡£TMBHRP酶的催化下转化成蓝色£¬并在酸的作用下转化成最终的黄色¡£颜色的深浅和样?#20998;?#30340;β-连环蛋白£¨β-catenin£©?#25910;?#30456;关¡£用酶标仪在450nm波长下测定吸光度£¨OD值£©£¬通过标?#35760;?#32447;计算样品小鼠β-连环蛋白£¨β-catenin£©浓度¡£

试剂盒组成£º

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1

1

 

封板膜

2片£¨48£©

2片£¨96£©

 

密封袋

1

1

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8¡æ保存

标准品£º270pg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8¡æ保存

标准品稀释液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8¡æ保存

酶标试剂

3 ml×1

6 ml×1

2-8¡æ保存

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8¡æ保存

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8¡æ保存

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8¡æ保存

终止液

3ml×1

6ml×1

2-8¡æ保存

20倍浓缩洗涤液

20ml×1

30ml×1

2-8¡æ保存

 

样本处理及要求£º

1. 血清£º室温血液自然凝固10-20分钟£¬离心20分钟左右£¨2000-3000/分£©¡£仔细收集上清£¬保存过程中如出现沉淀£¬应再次离心¡£

2. 血浆£º应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂£¬混合10-20分钟后£¬离心20分钟左右£¨2000-3000/分£©¡£仔细收集上清£¬保存过程中如有沉淀形成£¬应该再次离心¡£

3. 尿液£º用无菌管收集£¬离心20分钟左右£¨2000-3000/分£©¡£仔细收集上清£¬保存过程中如有沉淀形成£¬应再次离心¡£胸腹水¡¢脑脊液参照实?#23567;?/font>

4. 细胞培养上清£º检测分泌性的成份时£¬用无菌管收集¡£离心20分钟左右£¨2000-3000/分£©¡£仔细收集上清¡£检测细胞内的成份时£¬用PBS£¨PH7.2-7.4£©稀释细胞悬液£¬细胞浓度达到100/ml左右¡£通过反复冻融£¬以使细胞破坏并放出细胞内成份¡£离心20分钟左右£¨2000-3000/分£©¡£仔细收集上清¡£保存过程中如有沉淀形成£¬应再次离心¡£

5. 组织标本£º切割标本后£¬称取重量¡£加入?#27426;?#37327;的PBS£¬PH7.4¡£用液氮迅速冷冻保存备用¡£标本融化后仍然保持2-8¡æ的温度¡£加入?#27426;?#37327;的PBS£¨PH7.4£©£¬用手工或匀浆器将标本匀浆充分¡£离心20分钟左右£¨2000-3000/分£©¡£仔细收集上清¡£分装后?#29615;?#24453;检测£¬其余冷冻备用¡£

6. 标本采集后尽早进行提取£¬提取按相关文献进行£¬提取后应尽快进行实验¡£若不能马上进行试验£¬可将标本放于-20¡æ保存£¬但避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品£¬因NaN3抑制辣根过氧化物酶的£¨HRP£©活性¡£

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样£º在酶标包被板上设标准品孔10孔£¬在第一¡¢第二孔中分别加标准品100μl£¬然后在第一¡¢第二孔中加标准品稀释液50μl£¬混匀£»然后从第一孔¡¢第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第?#30446;×£?#20877;在第三¡¢第?#30446;?#20998;别加标准品稀释液50μl£¬混匀£»然后在第三孔和第?#30446;?#20013;先各取50μl弃掉£¬再各取50μl分别加到第五¡¢第六孔中£¬再在第五¡¢第六孔中分别加标准品稀释液50ul£¬混匀£»混匀后从第五¡¢第六孔中各取50μl分别加到第七¡¢第八孔中£¬再在第七¡¢第八孔中分别加标准品稀释液50μl£¬混匀后从第七¡¢第八孔中分别取50μl加到第九¡¢第十孔中£¬再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl£¬混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉¡££¨稀释后各孔加样量都为50μl£¬浓度分别为180pg/ml£¬120pg/ml £¬60pg/ml£¬30pg/ml £¬15pg/ml£©¡£

2. 加样£º分别设空白孔£¨空白对照孔不加样品及酶标试剂£¬其余各步操作相同£©¡¢待测样品孔¡£在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl£¬然后再加待测样品10μl£¨样品最终稀释度为5倍£©¡£加样将样品加于酶标板孔底部£¬尽量不触及孔壁£¬轻轻晃动混匀¡£

3. 温育£º用封板膜封板后置37¡æ温育30分钟¡£

4. 配液£º将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用¡£

5. 洗涤£º小心揭掉封板膜£¬弃去液体£¬甩干£¬每孔加满洗涤液£¬静置30秒后弃去£¬如此重复5次£¬拍干¡£

6. ?#29992;¸£好?#23380;加入酶标试剂50μl£¬空白孔除外¡£

7. 温育£º操作同3¡£

8. 洗涤£º操作同5¡£

9. 显色?#22909;?#23380;先加入显色剂A50μl£¬再加入显色剂B50μl£¬轻轻震荡混匀£¬37¡æ避光显色15分钟. 

10. 终止?#22909;?#23380;加终止50μl£¬终止反应£¨此时蓝色立转黄色£©¡£

11. 测定£º以空白空调零£¬450nm波长依序测量各孔的吸光度£¨OD值£©¡£ 测定应在加终止液后15分钟以内进?#23567;?/font>

注意事项£º

1£® 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用£¬酶标包被板开封后如未用完£¬板条应装入密封袋中保存¡£

2£® 浓洗涤液可能会有结晶析出£¬稀释时可在水浴中加温助溶£¬洗涤时不影响结果¡£

3£® 各步加样均应使用加样器£¬并经常校?#20113;?#20934;确性£¬?#21592;?#20813;试验误差¡£一次加样时间最好控制在5分钟内£¬如标本数量多£¬推荐使用排枪加样¡£

4£® 请每次测定的同时做标?#35760;?#32447;£¬最好做?#32431;ס?#22914;标本中待测物质含量过高£¨样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值£©£¬请先用样品稀释?#21512;?#37322;?#27426;?#20493;数£¨n倍£©后再测定£¬计算时请最后乘以总稀释倍数£¨×n×5£©¡£

5£® 封板膜只限一次性使用£¬?#21592;?#20813;交叉污?#23613;?/span>

6£® 底物请避光保存¡£

7£® ?#32454;?#25353;照说明书的操作进行£¬试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8£® 所有样品£¬洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理¡£

9£® 本试剂不同批号组分?#22351;?#28151;用¡£

10. 如与英文说明书有异£¬以英文说明书为准¡£


计算£º

?#21592;?#20934;物的浓度为横坐标£¬OD值为纵坐标£¬    

在坐标纸上绘出标?#35760;?#32447;£¬根据样品的OD      

?#28068;?#26631;?#35760;?#32447;查出相应的浓度£»再乘以稀释      

倍数£»或用标准物的浓度与OD值计算出标      

?#35760;?#32447;的直线回归方程式£¬将样品的OD      

代入方程式£¬计算出样品浓度£¬再乘以稀释      

倍数£¬即为样品的实际浓度¡£                  

标?#35760;?#32447;图   
£¨此图仅供参考£© 

 

试剂盒性能£º

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上¡£

2.批内与批见应分别小于9%11%

 

检测范围£º                                              

10pg/ml - 200pg/ml                                         

                            

保存条件及有效期£º

1.试剂盒保存£º£»2-8¡æ¡£

2£®有效期£º6个月

优质产品

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