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人大内皮素-1酶联免疫分析试剂盒实验原理

  • 所属分类其它资料

    上传时间2017/10/12

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  • 标签试剂盒  

资料简介

人大内皮素-1酶联免疫分析试剂盒使用目的
本试剂盒用于测定人血清血浆及相关液体样本中大内皮素-1BigET-1含量
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人大内皮素-1BigET-1水平用纯化的人大内皮素-1BigET-1抗体包被微孔板制成固相抗体往包被单抗的微孔中?#26469;?#21152;入大内皮素-1BigET-1再与HRP标记的大内皮素-1BigET-1抗体结合形成抗体-抗原-酶标抗体复合物经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样?#20998;?#30340;大内皮素-1BigET-1?#25910;?#30456;关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度OD值通过标?#35760;?#32447;计算样?#20998;?#20154;大内皮素-1BigET-1浓度
试剂盒组成

人大内皮素-1酶联免疫分析试剂盒标本要求
1标本采集后尽早进行提取提取按相关文献进行提取后应尽快进行实验若不能马上进行试验可将标本放于-20保存但应避免反复冻融
2不能检测含NaN3的样品因NaN3抑制辣根过氧化物酶的HRP活性
操作步骤
1.标准品的稀释本试剂盒提供原倍标准品一支用户可按照下?#22411;?#34920;在小试管中进行稀释
2.加样分别设空白孔空白对照孔不加样品及酶标试剂其余各步操作相同标准孔待测样品孔在酶标包被板上标准品准确加样50μl待测样品孔中先加样品稀释液40μl然后再加待测样品10μl样品最终稀释度为5倍加样将样品加于酶标板孔底部尽量不触及孔壁轻轻晃动混?#21462;?br />3.温育用封板膜封板后置37温育30分钟
4.配液将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤?#30418;?#24515;?#19994;?#23553;板膜弃去液体甩干每孔加满洗涤液静置30秒后弃去如此重复5次拍干
6.加酶?#22909;?#23380;加入酶标试剂50μl空白孔除外
7.温育操作同3
8.洗涤操作同5
9.显色?#22909;?#23380;先加入显色剂A50μl再加入显色剂B50μl轻轻震荡混匀37避光显色10分钟.
10.终止?#22909;?#23380;加终止液50μl终止反应此时蓝色立转黄色
11.测定以空白空调零450nm波长依序测量各孔的吸光度OD值 测定应在加终止液后15分钟以内进?#23567;?br />操作程序总结

计算
?#21592;?#20934;物的浓度为横坐标OD值为纵坐标在坐标纸上绘出标?#35760;?#32447;根据样品的OD?#28068;?#26631;?#35760;?#32447;查出相应的浓度再乘以稀释倍数或用标准物的浓度与OD值计算出标?#35760;?#32447;的直线回归方程式将样品的OD值代入方程式计算出样品浓度再乘以稀释倍数即为样品的实际浓度
注意事项
1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用酶标包被板开封后如未用完板条应装入密封袋中保存
2浓洗涤液可能会有结晶析出稀释时可在水浴中加温助溶洗涤时不影响结果
3各步加样均应使用加样器并经常校对其准确性?#21592;?#20813;试验误差一次加样时间最好控制在5分钟内如标本数量多推荐使用排枪加样
4请每次测定的同时做标?#35760;?#32447;最好做?#32431;ס?#22914;标本中待测物质含量过高样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值请先用样品稀释?#21512;?#37322;?#27426;?#20493;数n倍后再测定计算时请最后乘以总稀释倍数×n×5
5封板膜只限一次性使用?#21592;?#20813;交叉污?#23613;?br />6底物请避光保存
7严格按照说明书的操作进行试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8所有样品洗涤液和各种废弃物?#21152;?#25353;传染物处理
9本试剂不同批号组分不得混用
人大内皮素-1酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期
1试剂盒保存?#28023;?-8档
2有效期6个月

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