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猪三叶因子3TFF3elisa定量检测试剂盒说明书

  • 所属分类相关软件

    上传时间2017/10/13

  • 文件类型doc

    文件大小111 KB

  • 浏?#26469;?#25968;2323次

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  • 上传公司上海沪鼎生物科?#21152;?#38480;公司进入展台
  • 标签TFF3说明书  

资料简介

猪三叶因子3TFF3elisa定量检测试剂盒说明书

本试剂盒用于体外定量检测血清血浆组织细胞上清及相关液体样本中猪三叶因子3TFF3的含量

有效期6个月
保存条件2-8
本试剂盒仅供体外研究使用不用于临床诊断

实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验ELISA往预先包被猪三叶因子3TFF3捕获抗体的包被微孔中?#26469;?#21152;入标本标准品HRP标记的检测抗体经过温育并彻底洗涤用底物TMB显色TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样?#20998;?#30340;猪三叶因子3TFF3?#25910;?#30456;关用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度OD 值计算样品浓度

样本处理及要求
1. 血清全血标本请于室温放置2小时或4过?#36141;?#20110;1000g离心20分钟取上清即可检测或将标本放于-20或-80保存但应避免反复冻融
2. 血浆可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟或将标本放于-20或-80保存但应避免反复冻融
3. 组织匀浆用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织去除残留血液匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果称重后将组织剪碎将剪碎的组织与对应体积的PBS一般按1:9的重量体积比?#28909;?g的组织样品对应9mL的PBS具体体积可根据实验需要适当调整并做好记录推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂加入玻璃匀浆器中于冰上充分?#24515;?#20026;了进一步裂解组织细胞可以对匀浆液进行超声破碎或反复冻融最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟取上清检测
4. 细胞培养物上清或其它生物标本1000g离心20分钟取上清即可检测或将标本放于-20或-80保存但应避免反复冻融
注标本溶血会影响最后检测结果因此溶血标本不宜进行此项检测

标本处理
1. 本公司?#27426;?#35797;剂盒本身负责?#27426;?#22240;使用该试剂盒所造成的样本消耗负责请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量预留充足的样本
2. 实验前应预测标本含量如果标本浓度过高应?#21592;?#26412;进行稀释使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围计算时再乘以相应的稀释倍数标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)
3. 若所检样本不包含在说明书所列样本之中建议进行预实验验证其有效性并注意留存样本
4. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差
5. 若样本为细胞培养上清因该类样本干扰因素较多如?#21512;?#32990;状态细胞数量采样时间等所以可能存在检测不出的情况
6. 某些天然蛋白或重组蛋白包括原核及真核重组蛋白可能因为与本产品所使用的检测抗体?#23433;?#33719;抗体不匹配而不被检测出
7. 建议使用新鲜样本保存时间过长可能会存在蛋白?#21040;?#25110;变性导致实验结果偏差

需要而未提供的试剂和器材
1.酶标仪450nm
2.高精度加样器及枪头0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL
3.37恒温箱
4.蒸馏水或去离子水

试剂盒组成
名称 96孔配置 48孔配置 备注
微孔酶标板 8孔×12条 8孔×6条 无
标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 无
样本稀释液 6mL 3mL 无
检测抗体-HRP 10mL 5mL 无
20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物A 6mL 3mL 无
底物B 6mL 3mL 无
终止液 6mL 3mL 无
封板膜 2张 2张 无
说明书 1份 1份 无
自封袋 1个 1个 无
备注
1. 标准品浓度?#26469;?#20026;16008004002001000 pg/mL
2. 经过大量正常标本检验标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内实验过程中直接取50μL样本上样即可当有部分样本值超过最大标准品浓度时可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验

注意事项
1.?#32454;?#25353;?#23637;?#23450;的时间和温度进行温育?#21592;?#35777;准?#26041;?#26524;所有试剂都必须在使用前达到室温20-25档使用后立即冷藏保存试剂
2.洗板不正确可以导致不准确的结果在加入底物前确保尽量吸干孔内液体温育过程中不要让微孔干燥掉
3.消除板底残留的液体和手指印否则影响OD值
4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色已经变蓝的底物液不能使用
5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果
6.在储存和温育时避免强光直接照射
7.平衡至室温后再打开密封袋以?#28010;文?#32858;在冷板条上
8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性
9.不能使用过期产品
10.如果可能传播疾病所有的样品?#21152;?#31649;理好按?#23637;?#23450;的程序处理样品和检测装置

试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用
20×洗涤缓冲液的稀释蒸馏水按120稀释即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水

操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条剩余板条用自封袋密封放回4档
2. 设置标准品孔和样本孔标准品孔各加不同浓度的标准品50μL
3. 样本孔中加入待测样本50μL空白孔不加
4. 除空白孔外标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶HRP标记的检测抗体100μL用封板膜封住反应孔37水浴锅或恒温箱温育60min
5. 弃去液体吸水纸上拍干每孔加满洗涤液350μL静置1min甩去洗涤液吸水纸上拍干如此重复洗板5次?#37096;?#29992;洗板机洗板
6. 每孔加入底物AB各50μL37避光孵育15min
7. 每孔加入终止液50μL15min内在450nm波长处测定各孔的OD值

实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标标准品的浓度值为纵坐标在坐标纸上或用相关软件绘制标?#35760;?#32447;并得到直线回归方程将样品的OD值代入方程计算出样品的浓度

试剂盒性能
1. 检测范围50 pg/mL – 1600 pg/mL
2. 灵敏度最低检测浓度小于10 pg/mL
3. 特异性不与其它可溶性结构类似物交叉反应
4. 重复性板内变异系数小于10% 板间变异系数小于15%

说明
1. 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析本产品可能存在一定的质量技术风险
2. 最终的实验结果与试剂的有效性实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关请务必准备充足的标本备份
3. 不同批次的同一产品可能会有少许差别如检测限灵敏度以及显色时间等请依据试剂盒内说明书进行实验操作网站电子版说明书仅作参考
4. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果不能混用其他制造商的产品只有?#32454;?#36981;守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果

问题解答
若实验效果不好请及时对显色结果拍照保留所用板条及未使用试剂并妥善保存然后联系我公司技术支持为您解决问题同时您?#37096;?#20197;参考以下资料
问题 可能原因 解决方案
标?#35760;?#32447;差 吸取及洗涤不充分 充分的吸取及洗涤
移液不精确 检查和校正移液器
精密度低 洗涤不充分 按说明书要求充分洗涤和浸泡
混匀不充分和吸取试剂不足 充分混匀和吸取试剂
重复利用吸头容器和?#26448;?使用加样器要更换新的吸头使用新的容器和?#26448;?br />加样不精确 检查和校正移液器
O.D?#26723;?每孔加的试剂量不精确 校正移液器精确加入试剂
温育时间不正确 保证充足的温育时间
温育温度不正确 试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度
酶标记物或底物失效 通过混合酶标记物和底物颜色应迅速显现来检查
没有加入终止液 按照说明书实验操作步骤加入终止液
超出读数时间读数 在说明书推荐的读数时间内读数
样本值 不正确的样本储存方式 正?#21453;?#23384;样本使用新鲜样本进行实验
不正确的样本收集和处理方法 采取正确的样本收集和处理方法
待测物?#35797;?#26679;本中含量低 使用新鲜样本重复实验

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